熒光顯微鏡的基本構(gòu)造通常由普通光學顯微鏡再加一些如熒光光源、激發(fā)濾片、雙色束分離器及阻斷濾片等附件的基礎(chǔ)上組成。同時采用的熒光光源一般為超高壓汞燈，它可發(fā)出各種波長的光，且每種熒光物質(zhì)都會有一個產(chǎn)生強熒光的激發(fā)光波長，這時需加置激發(fā)濾片，通常有紫外、紫色、藍色及綠色激發(fā)濾片，僅需使一定波長的激發(fā)光透過并照射到標本上，并將其他光都吸收掉。

　　二、影響到熒光顯微鏡成像效果的因素

　　影響熒光顯微鏡成像的熒光因素很多，主要包括：熒光樣品的制備，熒光光源的選擇，濾片轉(zhuǎn)盤的設(shè)計，熒光濾片的組合策略（激發(fā)光濾片，發(fā)射光濾片，雙色鏡分光濾片，帶寬選擇），顯微鏡物鏡種類，顯微鏡攝像系統(tǒng)的選擇等問題。熒光的激發(fā)、濾光、成像、淬滅，熒光實驗的調(diào)整就是怎么才能協(xié)調(diào)好以上因素得到好的效果，其中影響到成像效果的一個重要因素即是熒光光源。

　　三、熒光顯微鏡光源種類及介紹

　　熒光顯微鏡的常用光源通常都是白光光源：高壓汞燈，氙燈，金屬鹵素燈和LED白光光源以及的LED單波長光源。

　　1、汞燈

　　超高壓汞燈（50-200W），它是用石英玻璃制作，中間呈球形，內(nèi)充一定數(shù)量的汞，工作時由兩個電極間放電，引起汞蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高，當汞*蒸發(fā)時，可達50～70個標準大氣壓力，這一過程一般約需5～15min。

　　2、氙燈

　　氙燈和汞燈做為白光源，都能提供從紫外到近紅外一系列波長的光，但它們卻有著不同的激發(fā)光譜。汞燈集中在近紫外、藍光以及綠光附近，這種在峰值的高激發(fā)能量確保產(chǎn)生明亮的熒光信號，但光毒性卻很強。

　　3、金屬鹵素燈

　　目前各大顯微鏡品牌廣泛使用的一種光源，它和汞燈的激發(fā)光譜很像，但它和顯微鏡以光纖相連，能散熱，壽命更長。光纖從光源連到顯微鏡上，可以大量減少光產(chǎn)生的熱能。金屬鹵素燈對活細胞成像的另一個優(yōu)勢是內(nèi)置強度設(shè)計裝置，可以容易調(diào)節(jié)激發(fā)光。也可以通過選擇直接連接獲得更好的激發(fā)效果。

　　4、LED白光熒光光源

　　這種光源的開關(guān)在毫秒間，減少樣品在光照下的暴露時間，延長壽命。另外，LED光的衰減即快又精確，長期活細胞試驗下可大大減少光毒性。和白光相比，LED僅僅在一個較窄的光譜激發(fā)，多個LED波段使得LED光源能為多色熒光提供應(yīng)用。

　　5.LED單波長熒光光源

　　此類光源屬于的熒光光源，價格昂貴。采用單波長LED模塊設(shè)計，輸出單個波長的熒光譜線，例如365nm/488nm/561nm/633nm,類似于激光光源。此類優(yōu)點突出；壽命長，采用光電快速切換，有效避免物理震動。LED單模塊光源的單色性好，極大的降低了白光光源的背景噪音，高效激發(fā)。程序控制適合整合到的成像系統(tǒng)中。

　　四、總結(jié)

　　在過去的十幾年中熒光顯微鏡以驚人的速度在進化，與熒光顯微鏡密切相關(guān)的熒光染料及探針不斷被發(fā)明，光電技術(shù)發(fā)展同樣迅速，創(chuàng)新的激光共聚焦成像技術(shù)，多光子成像技術(shù)，脈沖激發(fā)技術(shù)，高靈敏度固態(tài)探測器，高數(shù)值孔徑物鏡和各種不斷開發(fā)出來的基于計算機圖像分析方法，幫助生物醫(yī)學研究者進一步深入調(diào)查基于熒光的生物現(xiàn)象，讓研究者深入探究在自然環(huán)境中在活細胞內(nèi)。同時免疫熒光在醫(yī)學研究、診斷領(lǐng)域里的廣泛應(yīng)用，F(xiàn)ISH、各種熒光蛋白技術(shù)分別在基因組學、蛋白質(zhì)組學研究方面的推廣，生物醫(yī)學科研對儀器需要越來越高，先進的的熒光儀器和配件的發(fā)展將毫無疑問地繼續(xù)。